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柱式法提取組織 RNA 試劑盒
貨號:R1240
規(guī)格:50T/100T
保存:室溫(15℃-25℃)干燥保存,有效期 1 年。
注意:使用前請先在洗滌液和漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽。
產(chǎn)品簡介:該試劑盒對經(jīng)典的異硫氰酸胍抽提 RNA 的方法進行了改良。改良后的裂解液能迅速裂解細胞,釋放出 RNA 的同時滅活 RNase。RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜上,再通過一系列漂洗和離心等步驟進一步將蛋白等雜質(zhì)去除,最后用 RNase-Free ddH2O 將 RNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。本試劑盒操作快速便捷,安全無需使用酚、氯仿等有毒試劑,操作安全。
操作步驟:
1、細胞裂解取 25mg 左右組織,每管加入 600ul 裂解液,小鋼珠破碎,冰浴放置 5min。
2、向吸附柱中加入混合液。4℃ 13000rpm 離心 3min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
3、向吸附柱中加入 600ul 洗滌液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),4℃13000rpm 離心 2min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
4、向吸附柱中加入 50ul Dnase 酶,靜置 10~15min。
5、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)。4℃13000rpm 離心 2min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
6、重復(fù)操作步驟 5。
7、4℃ 13000rpm 離心 2min,將吸附柱敞口室溫放置 3min,以除去多余的乙醇。
8、將吸附柱放到一個干凈的離心管上,向吸附柱中加入 30-100μL 洗脫液,室溫放置 2min,4℃,13000rpm 離心 1min,得到 RNA 溶液,RNA 保存于-80℃。
注意事項:
1、所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為 RNase-free 產(chǎn)品,操作過程要小心,帶口罩、手套避免環(huán)境中 RNA 酶污染樣品。
2、洗脫液的體積不應(yīng)少于 30μL,體積過少會影響提取效率,RNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-80℃,以防 RNA 降解。
3、RNA 濃度及純度檢測:提取的 RNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260/OD280 比值應(yīng)為 2.0-2.2。
備注:25mg 小鼠肝組織樣品,用 50μL RNase-free ddH2O 洗脫。
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