Western Blot膜的選擇
Western Blot印跡常用的轉(zhuǎn)移膜主要是硝酸纖維素膜(Nitrocellulose Blotting Membranes,NC)和PVDF膜,此外也有用尼龍膜、DEAE纖維素膜做蛋白印跡。
選擇的根據(jù)主要有:
a. 膜與目的蛋白分子的結(jié)合能力(也就是單位面積的膜能結(jié)合蛋白的載量),以及膜的孔徑(也就是攔截蛋白的大?。?br />b. 不影響后續(xù)的顯色檢測(cè)(也就是適和用于所選的顯色方法,信噪比好);
c. 如果后繼實(shí)驗(yàn)有其他要求,比如要做蛋白測(cè)序或者質(zhì)譜分析,還要根據(jù)不同目的來挑選不同的轉(zhuǎn)移膜。
NC膜的生產(chǎn)原理
勻漿配比
購買回來的原料硝酸纖維素粒子是一種非常普遍的有機(jī)化學(xué)物,溶解形成混漿,在該漿體內(nèi),通過加入一定比例的試劑來調(diào)整后形成的膜的性質(zhì),一般主要包含表面活性劑/高分子聚合物/鹽離子/成型劑等溶解的一個(gè)緩沖體系內(nèi)。不同的廠家加入的溶液配方不一樣,導(dǎo)致了產(chǎn)品的差異。
滾筒鋪膜
配好的勻漿通過滾筒,形成了一張薄膜,平攤在十分光滑的平面載體上。過程與造紙非常相似。
成型
當(dāng)勻漿內(nèi)的成型劑開始揮發(fā),膜逐步干燥成型。同時(shí)在這個(gè)過程中由于溫度比較高,有些廠家在這個(gè)過程采取了在密閉腔體內(nèi)成型,同時(shí)補(bǔ)充配方溶液的形式,來避免一些有效成分的蒸發(fā)。
切割
通過以上步驟生產(chǎn)出來的膜是呈一個(gè)寬度極大的產(chǎn)品,寬度的大小直接和滾筒的大小相關(guān),滾筒越大生產(chǎn)越方便,但設(shè)備的成本也越高.寬膜要經(jīng)過切割才能成為我們購買到的25mm或18mm(或20mm)寬的膜,而長度上,成品卷膜和寬膜的長度是相同的.理論上可以讓廠家切成你需要的任意寬度,但這樣會(huì)造成原料的浪費(fèi)和人力成本的增加,后來廠商在和試紙生產(chǎn)廠家的協(xié)調(diào)過程中,綜合用料成本和生產(chǎn)便利性基本確定了上面說的寬度,以次為標(biāo)準(zhǔn)。
從生產(chǎn)過程,我們可以得知,NC膜本身已經(jīng)添加了表面活性劑來改善親水能力,而且已經(jīng)存在有一定的緩沖系統(tǒng)(雖然對(duì)紙條測(cè)試影響不會(huì)很大)。