常用貯液與溶液 配置 使用
更新時(shí)間:2011-01-05 | 點(diǎn)擊率:2995
常用貯液與溶液 配置 使用 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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常用貯液與溶液 1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。 1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。 10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí),無DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性, 須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動(dòng),直至牛血清蛋白*溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。 1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水,分成小份貯存于-20℃?;蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇 至微量離心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。 8mol/L乙酸鉀(potassium acetate):溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中,加水定容到100ml。 1mol/L氯化鉀(KCl):溶解7.46g氯化鉀于足量的水中,加水定容到100ml。 3mol/L乙酸鈉(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中,用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三鈉鹽?;蚍Q取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。 1mol/L HEPES:將23.8gHEPES溶于約90ml的水中,用NaOH調(diào)pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl:加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份貯存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。 100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的異丙醇中,定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20℃。 20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動(dòng),直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。 10mg/mlRnase(無DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl調(diào)pH至7.5,于-20℃貯存。(配制過程中要戴手套) 5mol/L氯化鈉(NaCl):溶解29.2g氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。 10N氫氧化鈉(NaOH):溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),氫氧化鈉*溶解后用水定容至1L。 10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至*溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。 100%三氯乙酸(TCA):在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水,用磁力攪拌器攪拌直至*溶解。(稀釋液應(yīng)在臨用前配制) 2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用鋁箔包裹裝液管,貯存于-20℃。 100×Denhardt試劑(Denhardt's regent)
10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端連接)
將配制好的緩沖液分裝成小份,貯存于-20℃ 。 100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions) 可以購(gòu)買到100mmol/L純dNTPs貯液,-80℃可貯存至少6個(gè)月。 10mmol/L dNTP混合液
加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中,加水至終體積100ml,用磁力攪拌器攪拌溶解。 20×SSC
溶解檸檬酸三鈉(二水)和氯化鈉于約0.9L水中,加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0,用水補(bǔ)足體積至1L。 DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1%。在37℃溫浴至少12h,然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min,以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng),不可用DEPC處理Tris緩沖液。 甲酰胺(deionized formamide) 直接購(gòu)買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中,用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過濾除去樹脂后分成小份,充氮?dú)庥?/font>-80℃貯存(防止氧化)。 磷酸緩沖液(phosphate buffer) 按照下表所給定的體積,混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉(單堿)和1mol/L 磷酸氫二鈉(雙堿)貯液,獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O)貯液:溶解138g于足量水中,使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉(Na2HPO4)貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。
將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中,再根據(jù)所要求的pH(25℃下)加一定量的濃鹽酸(11.6N),用水調(diào)整終體積至1L。
電泳緩沖液 50×Tris-乙酸(TAE)緩沖液
1%溴酚藍(lán)(bromophenol blue) 加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中,攪拌或渦旋混合直到*溶解。 1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF) 溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙錠(ethidium bromide) 小心稱取1g溴化乙錠,轉(zhuǎn)移到廣口瓶中,加100ml水,用磁力攪拌器攪拌直到*溶解。用鋁箔包裹裝液管,于4℃貯存。 凝膠上樣液(gel loading solutions) 6×堿性凝膠上樣液(室溫貯存)
LB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中:
SOB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中:
用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份,高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后,再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。 SOC培養(yǎng)基 成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制,只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后,除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外,再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水中,再用水補(bǔ)足到100ml,用0.22um的濾膜過濾除菌)。 TB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中:
2×YT培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中:
YPD培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中:
四.常用抗生素 氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 甲氧西林(methicillin)(100mg/ml) 溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml) 溶解100mg卡那霉素于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解250mg氯霉素足量的無水乙醇中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml) 溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml) 溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中,后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 四環(huán)素(tetracyyline)(10mg/ml) 溶解100mg四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中,或者將無堿的四環(huán)素溶于無水乙醇,定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光,于-20℃貯存。常以10ug/ml~50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。 |